Kāds ir PCR produkta attīrīšanas mērķis?

2024 Autors: Miles Stephen | [email protected]. Pēdējoreiz modificēts: 2023-12-15 23:38

Attīrīšana DNS no a PCR reakcija parasti ir nepieciešama pakārtotai lietošanai, un tā atvieglo fermentu, nukleotīdu, primeru un bufera komponentu noņemšanu. Tradicionāli to paveica, izmantojot organiskās ekstrakcijas metodes, piemēram, fenola hloroforma ekstrakciju, kam sekoja etanola izgulsnēšana.

Jautājums ir arī, kāpēc ir nepieciešams attīrīt PCR produktus?

Tev vajag attīra PCR produktus atbrīvoties no neizmantotajiem primeriem, nukleotīdiem un fermentiem, lai optimizētu ligācijas panākumus, kas saglabās un sekvencēs produkts no PCR . Uz attīrīt uz PCR produkti , tiek izmantota izmēra izslēgšanas hromatogrāfija.

Turklāt, kas man jādara pēc PCR? Lai maksimāli palielinātu atgūšanu, divas reizes izskalojiet aiztures kausu ar 10 līdz 20 µL TE vai ūdeni. Fināls PCR reakcija var saturēt līdz pat mikrogramam pastiprinātas DNS, ko var izmantot dažādiem molekulārās bioloģijas lietojumiem. Šīs lietojumprogrammas var būt vairāk vai mazāk jutīgas pret atlikušajām sastāvdaļām PCR reakcijas maisījums.

Var arī jautāt, kā jūs tīrāt PCR produktus?

Klasiskās metodes izmanto, lai tīrs uz augšu PCR produkti pirms sekvencēšanas ietver gēla elektroforēzi, etanola izgulsnēšanu un kolonnu hromatogrāfiju. Lai gan šīs metodes ir diezgan efektīvas, tās var ātri kļūt apgrūtinošas, vienlaikus apstrādājot vairākus paraugus un uzrāda dažādas paraugu zuduma pakāpes.

Kāpēc DNS ir jātīra?

Mēs tīrs uz augšu DNS no ūdens šķīdumiem, lai noņemtu bufersāļus, fermentus vai citas vielas, kas varētu ietekmēt pakārtotos lietojumus. Piemēri ietver PCR reakciju tīrs uz augšu, tīrs līdz pēc ierobežojuma sagremo un tīrs genoma vai plazmīda DNS piesārņots ar šūnu proteīniem/atkritumiem.