Cik maksā nosiešanas pārveidošana?

2024 Autors: Miles Stephen | [email protected]. Pēdējoreiz modificēts: 2023-12-15 23:38

Transformācija . Pievienojiet 1–5 µl nosiešana maisījums kompetentajām šūnām transformācija . Pagarināts nosiešana ar PEG izraisa kritumu transformācija efektivitāte (ātri Ligācija Komplekts). Elektroporācija ir ieteicama lielām konstrukcijām (>10 000 bp).

Šeit norādīts, cik daudz nosiešanas produkta man ir nepieciešams transformācijai?

Transformācija . Pievienojiet 1–5 µl nosiešana maisījums kompetentajām šūnām transformācija . Pagarināts nosiešana ar PEG izraisa kritumu transformācija efektivitāte (ātri Ligācija Komplekts). Elektroporācija ir ieteicama lielām konstrukcijām (>10 000 bp).

Pēc tam rodas jautājums, kas ir nosiešana un transformācija? Tipiskā klonēšanas eksperimentā pētnieki vispirms ievieto DNS gabalu, piemēram, gēnu, apļveida DNS daļā, ko sauc par plazmīdu. Šajā darbībā tiek izmantoti restrikcijas enzīmi un DNS ligāze, un to sauc par a nosiešana . Pēc a nosiešana , nākamais solis ir DNS pārnešana baktērijās procesā, ko sauc transformācija.

Pēc tam var arī jautāt, cik daudz DNS ir nepieciešams ligēšanai?

Lai nodrošinātu efektivitāti, vektora + ieliktņa kopējai koncentrācijai jābūt no 1 līdz 10 Μg/ml nosiešana . Vektors: ieteicamās molārās attiecības ir no 1:1 līdz 1:10 (parasti ir 1:3). Ja neesat pārliecināts par savu DNS koncentrācijās, veiciet vairākas nosiešanas ar dažādām attiecībām.

Cik ilgi var uzglabāt ligācijas reakciju?

Ligācijas var veikt istabas temperatūrā vai vēsākā temperatūrā (domājiet, ka 12-16°C) nakti vai pat dažas dienas, ja tu esmu tiešām aizņemts. Jūs varat arī uzglabāt nosiešanu ledusskapī un vēlāk izņemt, lai turpinātu ligēšanu istabas temperatūrā kā garš kā nepieciešams.