Kā DNS koncentrāciju aprēķina, izmantojot spektrofotometru?
Kā DNS koncentrāciju aprēķina, izmantojot spektrofotometru?

Video: Kā DNS koncentrāciju aprēķina, izmantojot spektrofotometru?

Video: Kā DNS koncentrāciju aprēķina, izmantojot spektrofotometru?
Video: Anti-Aging: сецет к старению в обратном направлении 2024, Novembris
Anonim

DNS koncentrācija ir aplēses pēc mērot absorbciju pie 260 nm, pielāgojot A260 duļķainuma mērījums ( mēra ar absorbcija pie 320 nm), reizinot autors atšķaidīšanas koeficients un izmantojot attiecības, kuras A260 no 1,0 = 50 µg/ml tīra dsDNS.

Cilvēki arī jautā, kā jūs atrodat DNS koncentrāciju un tīrību?

Novērtēt DNS tīrība , izmēra absorbciju no 230 nm līdz 320 nm, lai noteiktu citus iespējamos piesārņotājus. Visbiežāk tīrības aprēķins ir attiecība starp absorbciju pie 260 nm, dalīta ar rādījumu pie 280 nm. Laba kvalitāte DNS būs A260/A280 attiecība 1,7–2,0.

Tāpat kāda ir laba DNS koncentrācija? A labi kvalitāti DNS paraugam jābūt ar A260/A280 attiecība 1,7-2,0 un A260/A230 attiecība ir lielāka par 1,5, taču, tā kā dažādu metožu jutība pret šiem piesārņotājiem ir atšķirīga, šīs vērtības ir jāņem vērā tikai kā norādes par jūsu parauga tīrību.

Kā NanoDrop aprēķina DNS koncentrāciju šajā sakarā?

Jūs reiziniet absorbcijas vērtību pie 260 nm ar fiksētu koeficientu (tas ir 50 DNS ), un jūs saņemat DNS koncentrācija . Voilá. (Labi, tehniski tas ir 10 mm bieza parauga A260, kas reizināts ar 50; NanoDrop izsaka A260 tā, it kā paraugs būtu 10 mm biezs, piemēram, standarta kivetē).

Kāpēc mums bija jāizmanto spektrofotometrs, lai noteiktu mūsu DNS?

A spektrofotometrs ir spēj noteikt vidējo nukleīnskābju koncentrāciju DNS vai RNS, kas atrodas maisījumā, kā arī to tīrība. Izmantojot Bēra-Lamberta likums it ir iespējams saistīt absorbētās gaismas daudzumu ar absorbējošās molekulas koncentrāciju.

Ieteicams: