Kāpēc Southern blotting izmanto nitrocelulozes membrānu?

2024 Autors: Miles Stephen | [email protected]. Pēdējoreiz modificēts: 2023-12-15 23:38

Sākotnējā protokolā nitrocelulozes membrāna ir bijis lietots priekš blotēšana gadījumā, ja Southern blot bet pēdējā laikā neilons membrānas ir īstenoti blotēšana process, pateicoties to spējai efektīvi saistīt lielāku DNS daudzumu, kas ļauj Southern blot jāveic ar mazāku daudzumu

Tātad, kāpēc blotēšanai tiek izmantota nitrocelulozes membrāna?

Nitrocelulozes membrānas ir populāra matrica lietots olbaltumvielās blotēšana jo ir augsta proteīnu saistīšanās afinitāte, savietojamība ar dažādām noteikšanas metodēm (ķīmiluminiscence, hromogēna un fluorescence) un spēja imobilizēt proteīnus, glikoproteīnus vai nukleīnskābes.

Kā arī, kāpēc DNS tiek pārnesta uz neilona membrānu? Izmantojot 0,4 M NaOH kā nodošana šķīdinātājs pēc gela īsas pirmapstrādes skābē, DNS laikā tiek attīrīts nodošana . Iedarbība DNS uz ultravioleto gaismu vai nu gēlā, vai pēc tam nodošana uz neilona membrāna , samazina tā spēju hibridizēties.

Turklāt kāds ir Southern blotting mērķis?

A Southern blot ir metode, ko izmanto molekulārajā bioloģijā konkrētas DNS sekvences noteikšanai DNS paraugos. Dienvidu blotēšana apvieno ar elektroforēzi atdalītu DNS fragmentu pārnešanu uz filtra membrānu un sekojošu fragmentu noteikšanu ar zondes hibridizāciju.

Kā Southern blotting palīdz tiesu medicīnas pētījumos?

A Southern blot , kas nosaukts tās izgudrotāja Edvīna vārdā Dienvidu , ir metode, ko izmanto, lai pārbaudītu konkrētas DNS sekvences klātbūtni DNS paraugā. Kad indivīda DNS ir sagremota ar īpašu restrikcijas enzīmu, iegūtie fragmenti tiek analizēti ar Southern blot analīze.